药学论文_聚乙二醇化重组人干扰素α2b位置异构

文章目录

1 材料与方法

1.1 样品

1.2 主要试剂及仪器

1.3 色谱条件

1.4 方法的验证

    1.4.1 专属性

    1.4.2 重复性

1.5 质量标准的建立

1.6 修饰位点分析

2 结果

2.1 方法的验证

    2.1.1 专属性

    2.1.2重复性

2.2 质量标准

2.3 修饰位点分析

3 讨论

文章摘要:目的建立聚乙二醇化重组人干扰素α2b（PEGylated recombinant human interferonα2b,PEG-rhIFNα2b）位置异构体比例的离子交换高效液相色谱（ion exchange high performance liquid chromatography,IEC-HPLC）测定法,并对各异构体修饰位点进行分析。方法色谱柱采用Proteomix SCX-NP10（10.0 mm×250 mm,10μm）;流动相A为:1.8 mmol/L一水合柠檬酸-3.3 mmol/L十二水合磷酸氢二钠（pH 5.3）,流动相B为:30 mmol/L柠檬酸三钠-35 mmol/L二水合磷酸二氢钠（pH 6.0）;线性梯度洗脱:0～180 min（0%B→12%B）,180～220 min（12%B→15%B）;流速为:0.4 mL/min;柱温为:25℃;进样量:不低于100μg。同时对IEC-HPLC法进行专属性及重复性验证。采用建立的方法测定3批PEG-rhIFNα2b的位置异构体比例,并通过SPSS 19.0软件进行分析,拟定5个位置异构体比例质量标准。采用建立的方法富集5个位置异构体的洗脱峰,进行修饰位点定位。结果空白对照和rhIFNα2b原液无色谱峰出现,对PEG-rhIFNα2b位置异构体测定无干扰,PEG-rhIFNα2b可见5个异构体峰,且分离度良好;同批PEG-rhIFNα2b连续测定3 d,峰1、2、3、4和5面积的总RSD分别为1.96%、2.53%、2.54%、1.05%和1.86%,均<3.0%。PEG-rhIFNα2b的5个位置异构体比例质量标准可拟定为:峰1为5%～9%、峰2为14%～21%、峰3为7%～10%、峰4为30%～34%、峰5为31%～39%。PEG-rhIFNα2b位置异构体峰1修饰位点主要为K31,峰2主要为K134,峰3主要为K131和K164,峰4主要为K83,峰5主要为K121,未检测到N-末端PEG修饰。结论建立了PEG-rhIFNα2b位置异构体比例的IEC-HPLC测定法,该方法具有良好的专属性及重复性,可用于PEG-rhIFNα2b位置异构体比例的测定。

文章关键词:

论文DOI:10.13200/j.cnki.cjb.003497

论文分类号:R927

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